TECHNICAL COLUMN
学习资源一、目的基因的克隆(以pshuttl-CMV质粒为例)1.选择适当酶切位点,进行酶切连接,将目的片段插入 pshuttl-CMV 质粒多克隆位点。
ELISPOT1.PBS 溶解抗原为 30 μg/ml,加 100 μl/孔于 PVDF 膜铺底的 96 孔灭菌板过夜;2. 第二天吸去包被液后,加 5%FCS 的 PRMI 1640 培养基 100 μl 封闭 1 小时,37 oC;3. 准备脾
1.将 E.coli /phage lysate 以 1:10-20 稀释在 TBST 溶液中。
2.将 4 张 82mm 的 nitrocellulose membranes(NC)浸入稀释后的 E.coli/ phage
lysate 中,室温下水平摇动 30 分钟,取出 NC 并使膜沥干。
3.用 50ml TBST 溶液洗膜 3 次,每次 10 分钟。
血清制备
1.取血后,37oC 下,让血液凝固 1 到 2 小时(不加抗凝剂);
2.4oC 冰箱过夜(让血块固缩);
3.当血清自然析出后, 4oC,3000 转/分,离心 10 分钟,分离血清,弃去
将 15-20cm 长的新生儿脐带放入无菌的 PBS 溶液中储存。(注:4℃下最多贮存 24 小时,室温下不超过 6 小时,否则废弃)
将对数生长的肿瘤细胞收集, 用无血清基质 10.0ml, 于 1500 转/分, 离心3min, 连续洗 3 次, 最后用无血清基质混匀, 用血球计数器计算肿瘤细胞数量(平均 5 个中方格的细胞计数×1000444即是肿瘤数/毫升)
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