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常见问题
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  • 试剂盒-标准曲线不一样?

    · ELISA比色法实验显色,是一个酶催化的实验。在一定范围内,环境温度越高,酶活性越强,相同孵育时间内,温度高的,检测数据高。相同温度,孵育时间长的,检测数据高。

    · 说明书的标曲只是一个参考用途,展示大概的结果形式。不能直接使用,否则,试剂盒就没有必要提供标准品了,客户直接用说明书的曲线来计算了,对吧。【每次实验,当时都需要做标准曲线,才是最准确的方法】

    · 标准曲线是否良好? 客户可以绘制相应的拟合曲线(线性,或者曲线形式),R2大于0.9以上是可以接受的,0.99那就是非常好,小数点后面9越多越好。


  • 试剂盒做多少个样品? [举例:KET6013]

    * 试剂盒规格的48或者96,通常代表的是反应次数或者孔的数量。而不是样品数量。(标准品,对照都会参与到反应或者加入到孔中,因此样品数量肯定会少)


    试剂盒做一次实验,需要客户做:6个标准品(标准品数量,根据各个说明书里面说的来设置,6个浓度点)+ 一个空白孔(标准含量为0) = 7。通常每个实验都要做复孔(最少2个复孔,也有做3个复孔的。2个复孔意味着1个东西,需要加到2个孔,统计学需求,算平均值等),这么一来被占用的孔就是7*2=14个孔。96-14=82个孔,只有这82个孔可以给客户拿去测试他的样品。如果也算是复孔,那么就是82/2=41个样品。这是最多可以测试多少样品。

    image.png

    总结:

    【2个复孔】样品数量= [ 96 - (标准品数量+对照组数量)*2] / 2

    【3个复孔】样品数量= [ 96 - (标准品数量+对照组数量)*3] / 3


    #强调#:标准品的数量,阳性对照,阴性对照 的设置,根据说明书来,有些试剂盒是没有阳性对照的。


    以上为一次性将试剂盒用完的样品数量。如果客户要做2次实验,需要绘制2次标曲。对应的,继续相减。



  • 特殊检测类型:生物发光法,bio-luminescence

    1. 主要涉及ATP类的试剂盒,消耗能量ATP,发光(萤火虫)。

    2. 主要的实验:荧光素酶分析实验。

    image.png

    使用仪器:

    1. 化学发光仪,

    2. 光度计(Luminometer),

    3. 多功能酶标仪(含化学发光,生物发光检测模块)。


  • ELISA实验数据不稳定,背景高:洗涤很关键

    1.试剂盒使用前,通常需要在室温下平衡30-60min。(温度对酶催化反应有影响)。

    2.洗板时需保证微孔板平放,将洗涤液注满各孔,但尽量避免漏液溢液,以每孔300 µl为宜;板洗次数一般为3次,要保证洗板的浸泡时间,每次浸泡时间一般为30-60 秒;尽量减少洗液残留量,推荐每次洗板后进行拍板,并及时更换吸水纸,避免吸水纸的碎屑粘到反应孔内。


  • 用什么96孔板?

    image.png

  • 96孔板:Solid plate & Strip(条) plate

    image.png

  • 比色法 & 荧光法:哪个更好?


    比色法:特定波长光穿透样品,光被吸收的情况。(酶标仪)(分光光度计)

    荧光法:特定波长光,激发染料,发出其它波长光的情况。(荧光/多功能,酶标仪)

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