TECHNICAL COLUMN
常见问题胶片背景很脏,有什么解决方法?
减少抗原上样量,降低一抗浓度,改变一抗孵育时间,提高牛奶浓度。
我的目的带很弱,怎么加强?
可以加大抗原上样量,这是最主要的。同时也可以将一抗稀释比例降低。
我做的蛋白质分子量很小(10KD),请问怎么做 WB?
可以选择 0.2μml 的膜,同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起,再转移。其他按步骤即 可。
我的细胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,为什么呢?
a)可能因为你的蛋白没有变性完全,可以适当提高SDS 浓度,同时将样品煮沸时间延长
b)也不排除你的抗原浓度过高,这时再加入适量上样缓冲液即可。
为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?
原因有很多:
a)你的细胞中不表达这种蛋白质,换一种细胞;
b)你的细胞中的蛋白质被降解掉了,你必需加入 PMSF,抑制蛋白酶活性;
c)你的抗体不能识别目标蛋白,多看看说明,看是否有问题。
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